一、概述
霍乱(cholera)是由霍乱弧菌所致的烈性肠道传染病,临床表现轻重不一,典型病例病情严重,有剧烈吐泻、脱水、微循环衰竭、代谢性酸中毒和急性肾功能衰竭等。治疗不及时常易死亡,属甲类传染病。过去将古典生物型霍乱弧菌所致的感染称为霍乱,由爱尔托生物型所致者称副霍乱。鉴于霍乱弧菌的两个生物型在形态和血清学方面几乎一样,两种弧菌感染的临床表现和防治措施基本相同,因此,分别命名为霍乱和副霍乱并无必要,而统称为霍乱。世界第五、六次大流行与古典生物型有关,第七次则由印尼地方流行的爱尔托生物型所致,延续至今未止。
1.流行病学:①传染源:病人与带菌者是霍乱的传染源。典型病人的吐泻物含菌量甚多,每毫升粪便可含107~9弧菌,这对疾病传播起重要作用。轻型病人易被忽略,健康带菌者不易检出,两者皆为危险传染源。潜伏期带菌者尚无吐泻,恢复期带菌者排菌时间一般不长,两者作为传染源的意义居次要地位。海洋甲壳类生物表面可黏附爱尔托弧菌,后者分泌甲壳酶,分解甲壳作为营养而长期存活。当进食污染海产品后可形成霍乱流行。实验观察,爱尔托弧菌为人工饲养的泥鳅、鳝鱼吞食后,可在后者体内生长繁殖,然后排入水中;因此泥鳅、鳝鱼可成为弧菌的保存宿主,散播病原菌,造成霍乱流行。②传播途径:本病主要借水传播,污染的食品和手以及苍蝇等对传播疾病也起一定作用。③易感人群:男女老幼均对本病易感。在新感染区,成人比儿童易受感染;在地方流行区,儿童发病率较成人为高,后者对感染的抵抗力随着对霍乱弧菌抗体滴度的升高而增加。病后再次发生严重感染者少见。实验感染霍乱弧菌的志愿者,对第二次感染的具高度抵抗力,其时间至少可维持3年。古典霍乱弧菌初次感染的免疫力能(100%保护力)较埃尔托弧菌者(90%保护力)为强。霍乱患者虽然对新感染的保护免疫可达数年,但对霍乱毒素和细菌的肠抗体仅维持一至数月。
2.病原学
⑴形态染色:霍乱弧菌革兰染色阴性,菌体长1.5~2.0μm,宽0.3~0.4μm,弯曲如逗点状,有一根极端鞭毛,其长度为菌体的4~5倍。该菌运动活泼,在暗视野悬液中可见穿梭运动,粪便可用于直接涂片检查。
⑵培养特性:霍乱弧菌在碱性(pH8.8~9.0)肉汤或蛋白胨水中繁殖迅速,表面形成透明菌膜。弧菌在营养琼脂或肉浸膏琼脂培养过夜后,其菌落大,半透明,带灰色。在选择性培养基中弧菌生长旺盛,常用者有胆盐琼脂、硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖培养基(TCBS)等。
⑶生化反应:01群霍乱弧菌和非典型01群霍乱弧菌均能发酵蔗糖和甘露糖,不发酵阿拉伯糖。非01群霍乱弧菌对蔗糖和甘露糖发酵情况各不相同。此外埃尔托生物型能分解葡萄糖产生乙酰甲基甲醇(即VP试验)。0139型能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露糖,产酸不产气,不发酵肌醇和阿拉伯糖。
⑷霍乱弧菌经干燥2小时或加热55℃10分钟即可死亡,煮沸立即死亡。弧菌接触1:2000~3000升汞或1:500000高猛酸钾,数分钟即被杀灭,在0.1%漂白粉中10分钟即死亡。霍乱弧菌在正常胃酸中能生存4分钟,在未经处理的粪便中存活数天。在pH7.6~8.8的浅水井中,古典霍乱弧菌平均存活7.5天,爱尔托霍乱弧菌为19.3天。爱尔托弧菌在海水和深水井中存活10~13天。氯化钠浓度高于4%或蔗糖浓度在5%以上的食物、香料、醋、酒等,均不利于弧菌的生存。霍乱弧菌在冰箱内的牛奶、鲜肉和鱼虾水产品存活时间分别为2~4周、1周和1~3周;在室温存放的新鲜蔬菜存活1~5天。霍乱弧菌在砧板和布上可存活相当长时间,在玻璃、瓷器、塑料和金属上存活时间不超过2天。
⑸抗原结构:霍乱弧菌有耐热的菌体(O)抗原和不耐热的鞭毛(H)抗原。H抗原为霍乱弧菌属所共有;O抗原有群特异性和型特异性两种抗原,是霍乱弧菌分群和分型的基础。群的特异性抗原可达100余种。
⑹分类:WHO腹泻控制中心将霍乱弧菌分为三群。①01群霍乱弧菌;②非01群霍乱弧菌;③不典型01群霍乱弧菌。霍乱弧菌能产生肠毒素、神经氨酸酶、血凝素、菌体裂解后能释放出内毒素。其中霍乱肠毒素(CT)在古典型、ET-Tor型和0139型之间很难区别。
3.发病机制:人体存在非特异性免疫,以抵挡霍乱弧菌的侵入。胃酸在其中起主要作用,胃大部切除后、大量饮水、大量进食使胃酸稀释均降低对霍乱弧菌的抵抗。但正常入食入霍乱弧菌量超过108,均可发病。人体的其他屏障如肠道动力、肠腔黏液、酶及胆盐等,霍乱弧菌却可以适应。霍乱弧菌通过鞭毛活动、黏蛋白溶解酶、黏附素以及细菌的化学趋化作用等,使弧菌能成功地黏附于肠黏膜上皮细胞,但不侵入细胞,继续繁殖,继而肠毒素起重要作用。霍乱肠毒素有A、B两个亚单位,具有毒素活性的亚单位A又可分为由二硫化物联结的A1和A2两个多肽,分子量分别为23~24kD和5~6kD。亚单位B有5个部分,每个分子量为11.6kD,可各自与肠黏膜上皮细胞边缘细胞膜的受体(Gm1神经节苷脂)结合。亚单位B与肠黏膜细胞结合后,亚单位A与毒素整个分子脱离,并移行至细胞膜内侧,其A1部分被释放至胞液内,激活腺苷环酶,后者使三磷酸腺苷变成环磷酸腺苷。大量的环磷酸腺苷积聚在黏膜细胞内,发挥第二信使作用,刺激隐窝细胞分泌氯离子并可能分泌碳酸氢根离子,同时抑制绒毛细胞对氯和钠离子的正常吸收。由于肠黏膜分泌增强,回收减少,因而大量肠液聚集在肠腔内,形成本病特征性的剧烈水样腹泻。霍乱弧菌的内毒素来自弧菌细胞壁,耐热,具有弧菌O抗原的特异性,与霍乱发病关系不大。弧菌产生的酶(如黏蛋白酶)、代谢产物或其他毒素(如血管渗透因子、溶血素等)对人体有一定损害作用。剧烈腹泻和呕吐,导致水和电解质大量丢失,迅速形成严重脱水,因而出现微循环衰竭。钾、钠、钙及氯化物的丧失,可发生肌肉痉挛、低钠、低钾和低钙血症等。由于胆汁分泌减少,肠液中有大量水、电解质和黏液,所以吐泻物呈米泔水样。碳酸氯盐的丢失,形成代谢性酸中毒。由于循环衰竭造成的肾缺血、低钾及毒素对肾脏的直接作用,可引起肾功能减退或衰竭。
4.病理改变:病理解剖可见病人小肠活检仅显示轻微炎症。绒毛细胞有变形的微绒毛或无微绒毛相伴的大伪足样胞质突起,自尖端细胞表面伸入肠腔。隐窝细胞也有伪足样突起伸到隐窝腔内。上皮细胞有线粒体肿胀和嵴垢消失、高尔基体泡囊数增加及内质网的扩张和囊泡形成。死亡病人的主要病理变化为严重脱水现象:尸僵出现早,皮肤干而发绀,皮下组织及肌肉干瘪。内脏浆膜无光泽,肠内充满米泔水样液体,胆囊内充满黏稠胆汁。心、肝、脾等脏器均见缩小。肾小球及间质的毛细管扩张,肾小管浊肿、变性及坏死。其他脏器也有出血、变性等变化。
二、临床表现
潜伏期1~3天,短者数小时,长者7天,大多急起,少数在发病前1~2天有头昏、疲劳、腹胀、轻度腹泻等前驱症状。古典生物型与0139型霍乱弧菌引起的疾病,症状较严重,埃尔托型所致者,轻型较多,无症状者也多。
1.典型病例病程分为3期。
⑴泻吐期:绝大多数病人以急剧腹泻、呕吐开始。腹泻为无痛性,少数病人可因腹直肌痉挛而引起腹痛不伴里急后重。大便开始为泥浆样或水样,尚有粪质;迅速成为米泔水样或无色透明水样,无粪臭,微有淡甜或鱼腥味,含大量片状黏液,少数重症病人偶有出血,则大便呈洗肉水样,出血多可呈柏油样,以埃尔托型所致者为多。大便量多,每次可超过1000ml,每日十余次,甚至难以计数。呕吐多在腹泻后出现,常为喷射性和连续性,呕吐物先为胃内容物,以后为清水样。严重者可为“米泔水”样,轻者可无呕吐。本期持续数小时至1~2天。
⑵脱水期:由于频繁的腹泻和呕吐,大量水和电解质丧失,病人迅速出现脱水和微循环衰竭。病人神志淡漠、表情呆滞或烦躁不安,儿童可有昏迷。口渴、志嘶哑、呼吸增快、耳鸣、眼球下陷、面颊深凹、口唇干燥、皮肤凉、弹性消失、手指皱瘪等。肌肉痉挛多见于腓肠肌和腹直肌。腹舟状,有柔韧感。脉细速或不能触及,血压低。体表体温下降,成人肛温正常,儿童肛温多升高。此期一般为数小时至2~3天。
⑶恢复期:病人脱水得到及时纠正后,多数症状消失而恢复正常,腹泻次数减少,甚至停止。声音恢复、皮肤湿润,尿量增加。约1/3病人有反应性发热,极少数病人,尤其是儿童可有高热。
2.临床类型
⑴无症状型:感染后无何症状,仅呈排菌状态,称接触或健康带菌者,排菌期一般为5~10天,个别人可迁延至数月或数年,成为慢性带菌者。
⑵轻型:病人微感不适,每日腹泻数次,大便稀薄,一般无呕吐无脱水表现,血压、脉搏均正常,血浆比重在1.026~1.030间,尿量无明显减少。
⑶中型:吐泻次数较多,每日达10~20次。大便呈米泔水样,有一定程度的脱水。血压降低(收缩压为9.31~12kPa),脉搏细速,血浆比重为1.031~1.040,24小时尿量在500ml以下。
⑷重型:吐泻频繁,脱水严重,血压低,甚至不能测出,脉速弱常不能触及,血浆比重>1.041,尿极少或无尿。
⑸暴发型:亦称干性霍乱,甚罕见。起病急骤,不待泻吐出现,即因循环衰竭而死亡。
3.并发症
⑴肾功能衰竭:由于休克得不到及时纠正和低血钾所引起,表现为尿量减少和氮质血症,严重者出现尿闭,可因尿毒症而死亡。
⑵急性肺水肿:代谢性酸中毒可导致肺循环高压,后者又因补充大量不含碱的盐水而加重。
⑶其他:低钾综合征、心律不齐及流产等。
三、医技检查
1.血液检查红细胞和血红蛋白增高,白细胞计数(10~20)×109/L或更高,中性粒细胞及大单核细胞增多。血清钾、钠、氯化物和碳酸盐降低,血pH下降,尿素氮增加。治疗前由于细胞内钾离子外移,血清钾可在正常范围内,当酸中毒纠正后,钾离子移入细胞内而出现低钾血症。
2.尿检查少数病人尿中可有蛋白、红白细胞及管型。
3.病原菌检查
⑴常规镜检:可见黏液和少许红、白细胞。
⑵涂片染色:取粪便或早期培养物涂片做革兰染色镜检,可见革兰阴性稍弯曲的弧菌。
⑶悬滴检查:将新鲜粪便做悬滴或暗视野显微镜检,可见运动活泼呈穿梭状的弧菌。
⑷制动试验:取急性期病人的水样粪便或碱性胨水增菌培养6小时左右的表层生长物,先做暗视野显微镜检,观察动力。如有穿梭样运动物时,则加入01群多价血清一滴,若是01群霍乱弧菌,由于抗原抗体作用,则凝集成块,弧菌运动即停止。如加01群血清后,不能制止运动,应再用0139血清重做试验。
⑸增菌培养:所有怀疑霍乱患者粪便,除做显微镜检外,均应做增菌培养。粪便留取应在使用抗菌药物之前,且应尽快送到实验室做培养。增菌培养基一般用pH8.4的碱性蛋白胨水,36~37℃培养6~8小时后表面能形成菌膜。此时应进一步做分离培养,并进行动力观察和制动试验,这将有助于提高检出率和早期诊断。
⑹分离培养:常用庆大霉素琼脂平皿或碱性琼脂平板。前者为强选择性培养基,36~37℃培养8~10小时霍乱弧菌即可长成小菌落。后者则需培养10~20小时。选择可疑或典型菌落,应用霍乱弧菌“0”抗原的抗血清做玻片凝集试验,若阳性即可出报告。近年来国外亦有应用霍乱毒素基因的DNA探针,做菌落杂交,可迅速鉴定出产毒01群霍乱弧菌。
⑺PCR检测:新近国外应用PCR技术来快速诊断霍乱。其中通过识别PCR产物中的霍乱弧菌毒素基因亚单位CtxA和毒素协同菌毛基因(TcpA)来区别霍乱菌株和非霍乱弧菌。然后根据TcpA基因的不同DNA序列来区别古典生物型和埃尔托生物型霍乱弧菌。4小时内可获结果,据称能检出每ml碱性蛋白胨水中10条以下霍乱弧菌。
⑻鉴别试验:古典生物型、埃尔托生物型和0139型霍乱弧菌的鉴别。
四、诊断依据
1.流行病学:病前5天内到过疫区;有与本病患者接触及(或)进污染饮食史。
2.临床特点:发病急,频繁地腹泻及呕吐、先泻后吐。可无腹痛及里急后重。吐泻物量大,初为黄水样,不久转为米泔水样。迅速出现脱水、循环衰竭及肌肉痛性痉挛(腹直肌及腓肠肌最为突出)。
3.实验室检查:采用患者吐泻物进行下列检查。
⑴直接悬滴检查:用高倍镜观察,可见成群的逗点状弧菌呈流星或穿梭状运动。
⑵增菌培养后,涂片镜检及荧光抗体染色检查阳性。
⑶免疫荧光增凝菌团法检查阳性。
⑷分离培养阳性。
⑸血清凝集试验:病后6天左右血清效价达l:100以上(注射过菌苗者须达l:200),或2次以上检查效价递升。
凡具有以上泻吐症状,且粪便培养阳性者,或在流行期间,具有以上典型症状,虽粪便培养阴性,但无其他原因可查者,均可确诊霍乱。
凡具有以上典型或类似的临床症状,或在流行期间、具有腹泻症状而无其他原因可查者,应先按疑似病例处理,疑似病例粪便培养每天1次,连续3次阴性,且血清学检查2次阴性者,可否定诊断。
五、容易误诊的疾病
1.大肠杆菌引起的腹泻:典型霍乱的临床表现也可由非O-I群弧菌和产生肠毒素的大肠杆菌(ETEC)引起。前者多数病人的腹泻伴剧烈腹痛和发热;1/4的病人粪便呈血性。大肠杆菌引起的腹泻一般病程较短。两者与霍乱的鉴别有赖于病原学检查。
2.各种细菌性食物中毒:如金黄色葡萄球菌、变形杆菌、蜡样芽胞杆菌及副溶血如金黄色葡萄球菌、变形杆菌、蜡样芽胞杆菌及副溶血弧菌引起者,各种食物中毒起病急,同食者常集体发病,常先吐后泻,排便前有阵发性腹痛,粪便常为黄色水样,偶带脓血。
3. 细菌性痢疾:部分霍乱患者的粪便呈洗肉水样或痢疾样,则需与细菌性痢疾鉴别,后者多伴腹痛和里急后重,粪便量少,呈脓血样。
4.急性砷中毒:以急性胃肠炎为主要表现,粪便为黄色或灰白水样,常带血,严重者尿量减少,甚至尿闭及循环衰竭等。检查粪便或呕吐物砷含量可明确诊断。
六、治疗原则
1.隔离确诊及疑诊病例应分别隔离,彻底消毒排泄物。病人症状消除后,粪便连续两次培养阴性方可解除隔离。
2.补液
⑴静脉补液:通常选择与患者所失去的电解质浓度相似的541液,其每升含NaCl 5g,NaHCO34g,KCl 1g,为防低血糖,常另加50%葡萄糖20ml,配制时可用0.9%NaCl 500ml,1.4%NaHCO3300ml,10%KCl 10ml,10%葡萄糖140ml比例配制。
静脉输液的量与速度依失水程度而定,24小时的补液量依病情轻重而定,轻度失水者应以口服补液为主,若有呕吐无法口服者给予静脉补液3000~4000ml/d,初1~2小时宜快速,5~10ml/min;中度失水补液4000~8000ml/d,最初1~2小时快速滴入,至血压、脉搏复常后,乃减至5~10ml/min;重度失水需每日补8000~12000ml,以二条静脉管道,先以40~80ml/min,以后减至20~30ml/min直至休克纠正后减速,直至脱水纠正。
儿童患者的粪便含钠量较低而含钾量较高,失水较严重,病情发展较快,易发生低血糖昏迷、脑水肿和低血钾症,故应及时纠正失水和补充钾盐。轻者24小时补液量为100~150ml/kg,中、重型患儿24小时静脉补液各为150~200ml/kg和200~250ml/kg,可用541液。婴幼儿可适当增加。最初15分钟内4岁以上儿童每分钟补液20~30ml,婴幼儿10ml/min。根据血浆比重计算,比重每升高0.001婴幼儿的补液量为每kg体重10ml,其总量的40%于30分钟内输入,余量于3~4小时输完。
碱性药物的补充使代谢性酸中毒迅速得到纠正也是治疗成功的重要条件。碳酸氢钠能迅速纠正酸中毒,乳酸盐和醋酸盐则于1~2小时内使酸中毒徐缓得到纠正。钾盐也需及时适当补充,可由静脉或口服给予。每1000ml静脉补液中含10~15mEq氯化钾,口服方中每1000ml水中含有醋酸钾、枸橼酸钾和碳酸氢钾各100g,成人每日3次,每次10ml,儿童适当减量。
⑵口服补液:霍乱病人口服氯化钠溶液后不能吸收,但钾盐和碳酸盐可以吸收,对葡萄糖的吸收能力也无改变,且葡萄糖可促使氯化钠和水分的吸收。因此,对轻、中型病人可予口服补液,对重症病人先予以静脉补液,待休克纠正、情况改善后,再改为口服补液。口服补液配方较多,皆大同小异。补液加温后口服或经鼻饲管注入。在第一个6小时,成人口服液量为700ml/小时,儿童每小时15~25ml/kg,腹泻严重时入液量可适当增加。以后每6小时出液量的1.5倍计算。呕吐并非口服补液的禁忌,但呕吐物量应计算在液量中。碳酸氢盐可为柠檬酸盐代替,后者较为稳定,不易潮解,也有良好纠酸作用,且能促进钠离子在小肠的吸收。蔗糖代替葡萄糖也可获得满意的疗效,但蔗糖用量为葡萄糖的1倍。甘氨酸也能促进水和电解质的吸收,可加入口服补液中,每1000ml溶液含110mmol甘氨酸。经甘氨酸治疗的患者粪便量、腹泻天数及口服液用量均显著减少。
3.抗菌治疗:抗菌药物控制病原菌后可缩短病程,减少腹泻次数。但仅作为液体疗法的辅助治疗。近年来已发现四环素的耐药菌株,但对多西环素仍敏感。目前常用药物:复方新诺明,每片含甲氧苄啶(TMP)80mg,磺胺甲噁唑(SMZ)40mg,成人每次2片,每天2次。小儿30mg/kg,分2次口服。多西环素成人每次200mg,每天2次,小儿每日6mg/kg分2次口服。诺佛沙星成人每次200mg,每日3次或环丙沙星成人每次250~500mg,每日2次口服。以上药物任选一种,连服3天。不能口服者可应用氨苄西林肌肉或静脉注射。
4.对症治疗
⑴纠正酸中毒:重型患者在输注541溶液的基础上尚需根据CO2结合力情况,应用5%碳酸氢钠酌情纠酸。
⑵纠正低血钾:补液过程中出现低血钾者应静脉滴入氯化钾,浓度一般不宜超过0.3%。轻度低血钾者可口服补钾。
⑶纠正休克和心力衰竭:少数患者经补液后血容量基本恢复,皮肤黏膜脱水表现已逐渐消失,但血压未复常者,可用地塞米松20~40mg或氢化可的松100~300mg,静脉滴注,并可加用血管活性药物多巴胺和阿拉明静脉滴注。如出现心衰、肺水肿,则应暂停或减慢输液速度,应用西地兰0.4mg或毒毛旋花子苷K0.25mg加葡萄糖20ml,缓慢静脉注射。必要时应用速尿20~40mg静脉注射,亦可应用度冷丁50mg肌注镇静。
⑷抗肠毒素治疗:目前认为氯丙嗪对小肠上皮细胞的腺苷环化酶有抑制作用,临床应用能减轻腹泻,可应用1~2mg/kg口服或肌注。黄连素亦有抑制肠毒素和具有抗菌作用,成人每次0.3g,每日3次口服。小儿50mg/kg,分3次口服。
5.治愈标准:①症状消失,大便性状恢复正常;② 停药后,粪便培养隔日l次,连续3次阴性。或从发病之日起,住院隔离l4天;③慢性带菌者大便培养隔日1次连续7次阴性;或胆汁培养每周1次,连续2次阴性;④随访:患者治愈出院后,每月随访1次(包括粪便培养),观察半年。
七、预防及预后
1.控制传染源:及时检出病人,尽早予以隔离治疗。对密切接触者应严密检疫,进行粪便检查和药物治疗,粪便培养应每日一次,连续2天,每一次粪检后给予服药可减少带菌者,一般应用多西环素200mg顿服,次日口服100mg。儿童每日6mg/kg,连服2天。亦可应用诺佛沙星,每次200mg,每日3次,连服2天。同时应做好国境卫生检疫和国内交通检疫,一旦发现病人或疑似患者,应立即进行隔离治疗,并对交通工具进行彻底消毒。
2.切断传播途径:加强饮水消毒和食品管理,对病人和带菌者的排泄物进行彻底消毒。此外应消灭苍蝇等传播媒介。
3.提高人群免疫力:以往应用全菌死菌苗或并用霍乱肠毒素的类毒素疫苗免疫人群,由于保护率低,保护时间短,且不能防止隐性感染和带菌者,因而已不提倡应用。目前国外应用基因工程技术制成并试用的有多种菌苗,现仍在扩大试用,其中包括:
⑴B亚单位-全菌体菌苗(BS-WC):这是由灭活的霍乱弧菌全菌体细胞(WC)和纯化的霍乱肠毒素B亚单位(BS)组成的菌苗。其中WC细胞壁含有脂多糖(LSP)和霍乱毒素协同菌毛(TCP)等抗原,能诱导机体产生抗菌抗体,从而抑制霍乱弧菌在肠道定居;而BS产生的抗毒抗体,则能中和CT的B亚单位,使霍乱肠毒素不能与肠黏膜受体结合,而无从发挥肠毒素作用。此菌苗保护率为65%~85%,对古典生物型霍乱弧菌的预防作用优于埃尔托生物型霍乱弧菌。
⑵减毒口服活菌苗CVD103-HgR:这是应用DNA重组技术将除去94%的CtxA基因,重组于古典生物型霍乱弧菌的569B株中,获得减毒株CVD103,然后导入一个抗汞(Hg)的编码基因进入HlyA的染色体位点,成为CVD103-HgR减毒株。此菌苗能明显对抗01群古典生物型和埃尔托生物型霍乱弧菌的感染。一般认为保护作用至少持续6个月。但动物实验表明此菌苗对O139型霍乱弧菌无保护作用。