对于低血糖的诊断，首先应立足于是否糖尿病患者。糖尿病患者治疗药物过量是最常见的原因。正在应用胰岛素治疗或口服优降糖等降糖药时的糖尿病人出现低血糖时常常是由于饮食改变或者发生休克所致。非糖尿病人发生低血糖一般与治疗药物、肝、肾功能衰竭、休克和脓毒症有关；或者内分泌疾病，如垂体功能低下或肾上腺功能不足。对于体质较健康的人应怀疑是否患有胰岛素瘤。给予葡萄糖前应首先测定血糖和胰岛素浓度，必要时测定C肽、皮质醇、游离脂肪酸、酮体和胰岛素抗体等。对于可疑胰岛素瘤的患者，应进行72小时禁食试验，测定葡萄糖和胰岛素浓度及二者的比值。

血浆胰岛素(pmol/L)/血浆葡萄糖毫摩尔/升).正常人比值小于50.0；胰岛素瘤病人比值增高。但胰岛素瘤病人有阵发性分泌胰岛素现象，有时增高有时减低。国外有人建议，对于诊断胰岛素瘤，测定胰岛素和葡萄糖的血标本只能在葡萄糖浓度最低时，或者葡萄糖浓度首次低于2.2毫摩尔/升时的血标本，测定结果根据胰岛素(uU/L)/葡萄糖(mg/dl)比值来解释，胰岛素介导的低血糖症比值应大于0.3；也有人建议使用胰岛素/（葡萄糖-30）的比值，使葡萄糖的水平“校正”到“基线”，比值超过1.0提示胰岛素瘤。